Serum şişesi uygulaması
Serum şişesi düşük ekstraksiyonlu borosilikat camdan yapılmıştır ve renksiz şeffaf şişe USP Tip I ve ASTM E 438 Tip I Standart Sınıf A gereksinimlerini karşılar. 20 dakika boyunca 121 derecede otoklavlanabilir ve 125 ml'ye bölünebilir , 250ml, 500ml, 1L, 2L hacme göre.
Serum şişesi, genellikle PET malzemeden enjeksiyon streç üfleme işlemi ile yapılan serum depolamak için bir kaptır. Ortam, hücre büyümesi için gerekli besindir. Kaynağına göre sentetik besiyeri ve doğal besiyeri olmak üzere ikiye ayrılır ve her ikisi de serum şişelerinde saklanabilir.
serum şişesi
Doğal ortam:
En yaygın olarak kullanılan doğal ortam serum, temelde buzağı serumudur. Serum, çeşitli hücre büyüme faktörlerini, yapışmayı teşvik edici faktörleri ve bunların çoklu aktif maddelerini içerir. Sentetik ortamla birleştiğinde hücreler sorunsuz bir şekilde çoğalabilir ve büyüyebilir. Serum, özel serum şişelerinde -5 ila -20 derece arasında saklanmalıdır.
Sentetik ortam:
Sentetik ortam, hücrelerin ihtiyaç duyduğu maddelerin türüne ve miktarına göre kesinlikle formüle edilmiştir. Deneysel koşulların kontrolünü kolaylaştıran pek çok türü ve bilinen bileşenleri vardır. Karbonhidratlar, amino asitler, lipidler, inorganik tuzlar, vitaminler, eser elementler ve hücre büyüme faktörleri içerir. Ancak, doğal ortamla karşılaştırıldığında, bazı doğal bilinmeyen bileşenler bilinen kimyasal bileşenlerle değiştirilemez. Bu nedenle, hücre kültüründe kullanılan temel sentetik ortam, sentetik kültürü aşmak için belirli miktarda doğal ortam bileşenleri de eklemelidir. Yetersiz baz, en yaygın uygulama buzağı serumu eklemektir.
Serum şişesinin şekli karedir, kavraması kolaydır, çoğu asit ve alkali korozyonuna dayanıklıdır, gevrekleşme sıcaklığı -70 derecedir ve -30 derecede hala belirli bir sertliğe sahiptir. Doğal ortam veya sentetik kültür olsun, iyi bir paketleme kabıdır. serum şişelerinde saklanabilir.
İnsan göbek kordonu kanı endotel progenitör hücrelerinin izolasyonu, kültürü ve tanımlanması ve gelişmiş donma-çözülme yöntemi ile hücresiz vasküler yapı iskelelerinin kurulması için
İnsan göbek kordonu kanından izole edilen ve kültürlenen endotelyal progenitör hücrelerin fizibilitesini ve klinik uygulama değerini araştırmak.
Yöntemler: Bengbu Tıp Fakültesi Birinci Bağlı Hastanesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Anabilim Dalı'nda tam süreli sezaryen geçiren fetüslerin göbek kordon kanı toplandı ve 50U/ml heparin içeren bir serum şişesine yerleştirildi. aseptik koşullar altında, 4 derecelik bir buz kutusunda saklandı ve hücrelere nakledildi Kültür odasında, göbek kordonu kanı mononükleer hücreleri, yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile elde edildi. Elde edilen mononükleer hücreler iki kısma ayrıldı ve fetal buzağı serumu M199 ortamı (FCS-M199) ve otolog serum M199 ortamı (AS-M199) eklendi. Ve insan fibronektin (HFN) içeren ve içermeyen (sırasıyla: F(0), F(1), A(0), A(1)) kültür kaplarına ekildiler. In vitro indüksiyon, farklılaşma ve genişletme yapıldı.
Yapışkan hücrelerin tüm indüksiyon ve farklılaşma süreci boyunca morfolojik değişiklikleri gözlemlendi ve immünohistokimya, immünofloresan ve akış sitometrisi gibi ilgili tekniklerle birlikte farklı açılardan tanımlandı.
Sonuçlar: 12 günlük kültürden sonra kordon kanı mononükleer hücreleri yapışmaya başladı. 3d'den sonra, iğ şekli görünmeye başladı ve ardından yapışık hücrelerin sayısı giderek arttı ve yavaş yavaş iğ şeklinde oldu. Bir haftaya kadar kültürlendiğinde, merkezde yuvarlak hücreler ve çevresinde iğsi hücrelerle tipik bir koloni oluştu. Hücreler 14 gün boyunca kültürlendiğinde, birbirine bağlı hücre kümeleri yavaş yavaş birbirine bağlandı ve ağ benzeri bir yapı oluşturdu. Aynı zamanda kültür süresinin sürekli artmasıyla uzun iğsi hücreler de yavaş yavaş kısalmaya başlamış ve tipik bir kaldırım taşı benzeri değişim göstermiştir.
Yapışan hücreler bir hafta süreyle kültürlendi ve insan fibronektinli ortamdaki hücre sayısının insan fibronektinli ortamdaki hücre sayısının önemli ölçüde yüksek olduğu ve iki farklı ortamdaki hücre sayısında önemli bir değişiklik olmadığı gözlendi.