Hücre kültürü sürecinde genellikle şu ya da bu türden sorunlar vardır. Hücre kültürünü küçümsemeyin ama üniversite soruları içeriyor. Kullanıcılarla iletişim kurarak önlenebilecek birçok sorun bulacaksınız. Aşağıdakiler, hücre kültürü sürecinde yaygındır. Anormalliğin nedenini analiz edin.
Petri kabı
1. Kültürlenmiş hücreler duvara yapışmaz
makul sebep
1. Aşırı tripsin sindirimi;
2. Mikoplazma kontaminasyonu;
3. Ortamın pH değeri çok alkalidir (NaHCO3 ayrışması);
4. Hücre yaşlanması;
5. Aşılanan hücrelerin başlangıç konsantrasyonu çok düşük veya çok yüksek.
Çözüm
1. Tripsin sindirim süresini kısaltın veya tripsin konsantrasyonunu azaltın;
2. Kültürü izole edin ve mikoplazmayı tespit edin. Standı veya inkübatörü temizleyin. Mikoplazma kontaminasyonu bulunursa kültürü atın;
3. pH'ı ayarlamak için steril asetik asit solüsyonu kullanın veya steril CO2 ile doldurun;
4. Yeni koruma hücrelerini etkinleştirin;
5. Optimum aşılanmış hücre konsantrasyonunu ayarlayın.
2. Süspansiyon hücrelerinin kümelenmesi
makul sebep
1. Kültür ortamı kalsiyum ve magnezyum iyonları içerir;
2. Mikoplazma kontaminasyonu;
3. Proteaz tarafından aşırı sindirim, hücre parçalanmasına neden olur;
4. DNA kontaminasyonu.
Çözüm
1. Hücreleri kalsiyum ve magnezyum içermeyen dengeli tuz solüsyonuyla yıkayın ve hafifçe üfleyin ve emdirin.
2. Hücreler, tek bir hücre süspansiyonu elde eder;
3. Kültürü ayırın ve mikoplazmayı tespit edin;
4. Hücrelerin DNasel tedavisi.
3. Kültürlenmiş hücreler yavaş büyür
makul sebep
1. Farklı kültür ortamı veya serumun değiştirilmesi nedeniyle;
2. Kültür ortamında hücre büyümesi için gerekli olan glutamin veya büyüme faktörleri gibi bazı bileşenler tükenmiş veya eksik veya yok edilmiş;
3. Kültürde az miktarda bakteri veya mantar kontaminasyonu var;
4. Reaktiflerin uygun olmayan şekilde saklanması;
5. Aşılanan hücrelerin başlangıç konsantrasyonu çok düşük;
6. Hücreler yaşlanmıştır;
7. Mikoplazma kontaminasyonu.
Çözüm
1. Yeni ortamın ve orijinal ortamın bileşimini karşılaştırın, hücre büyüme deneylerini desteklemek için yeni serumla eski serumu karşılaştırın ve hücrelerin kademeli olarak yeni ortama uyum sağlamasına izin verin;
2. Yeni hazırlanmış kültür ortamına geçin veya glutamin ve büyüme faktörleri ekleyin;
3. Kültür için antibiyotik içermeyen kültür ortamı kullanın, kontamine olduğu tespit edilirse kültürü atın;
4. Serum -10 ila -20 derecede saklanmalıdır. Kültür ortamı karanlıkta 2-8 derecede saklanmalıdır. Serum içeren tam kültür ortamı 2-8 derecede saklanmalı ve 1 hafta içinde tüketilmelidir;
5. Aşılanan hücrelerin başlangıç konsantrasyonunu artırın;
6. Yeni bir koruma hücresine geçin;
7. Kültürü izole edin ve mikoplazmayı tespit edin. Standı ve inkübatörü temizleyin. Mikoplazma kontaminasyonu bulunursa kültürü atın.
Dördüncüsü, kültürlenmiş hücreler zayıf büyür
makul sebep
A. Hücrenin kendisinin durumu
1. Hücre pasajlarının sayısı fazladır ve hücreler yaşlanmaktadır;
2. Hücre aşılama miktarı: çok düşük aşılama miktarı, yavaş hücre büyümesi;
3. Hücrelerin geçişi çok geç: geçişten sonra hücrelerin büyümesini etkileyen hücre zehirlenmesi;
4. Tripsin sindirim süresi çok uzun veya çok kısa: süre çok uzunsa hücreler ölür; süre çok kısaysa hücreler tam olarak kümelere ayrılmaz ve hücreler ölür;
5. Hücrelerin kriyoprezervasyonu ve geri kazanımı: yavaş dondurma ve anında parçalanma.
B. Kirlilik
1. Mikoplazma kontaminasyonu;
2. Küf kirliliği.
C, kültür ortamı veya serum
1. Serum veya medyum değişiminden önce doğrulama yok;
2. Seçilen ortamın uygun olup olmadığı;
3. Besiyeri hazırlığının uygun olup olmadığı;
4. Ortam hazırlığının doğru olup olmadığı.
D. çevreyi geliştirmek
1. CO2 beslemesi normal mi?
2. İnkübatör veya çalkalayıcının sıcaklığı uygun şekilde kontrol ediliyor.
Çözüm
Yukarıdaki dört olası nedene göre, hedefe yönelik çözümler üretin
1. Hücrelerin durumuna dikkat edin: pasaj sayısı, aşılama miktarı vb.;
2. Kirlilikten kaçının (düzenli, yasal ve izlenebilir serum kullanın);
3. Tercihen doğrulanmış uygun serum veya ortam kullanın;
4. Laboratuvar ortamına dikkat edin.
Kültürde hücre ölümünün olası nedenleri
1. Kuluçka makinesinde CO2 yok;
2. Küvözdeki sıcaklık çok fazla dalgalanıyor;
3. Hücreler, kriyoprezervasyon veya geri kazanım sırasında hasar görür;
4. Kültür ortamının ozmotik basıncı yanlıştır;
5. Kültür ortamında toksik metabolitlerin birikmesi.
Çözüm
1. İnkübatördeki CO2'yi tespit edin;
2. Küvözdeki sıcaklığı kontrol edin;
3. Yeni bir korunmuş hücre türü alın;
4. Kültür ortamının ozmotik basıncını tespit edin;
5. Taze kültür ortamına geçin;
