Hepimizin bildiği gibi, laboratuvarda kültürlenen hücre türleri kabaca iki türe ayrılabilir: yapışık hücreler ve süspansiyon hücreleri ve her iki durumda da yalnızca birkaç hücre türü bulunur.
Süspansiyon hücreleri, lenfositler ve kan sisteminden türetilen çoğu hücre gibi desteklere dayanmadan bir ortamda asılı durumda büyüyebilen bir hücre tipini ifade eder. (fare lösemi hücreleri WEHI-3, insan lösemi hücreleri K-562, HL-60 gibi). Endüstride, giderek daha fazla yapışık hücre evcilleştirildi ve tam süspansiyon halinde kültürlendi. Şu anda endüstride ağırlıklı olarak SP2/0, NS0, CHO, BHK ve HEK293 hücreleri kullanılmaktadır ve esas olarak rekombinant protein üretimi için kullanılmaktadır; veterinerlik biyolojik ürünlerinde yaygın olarak kullanılan pasaj hücreleri, esasen tam süspansiyon içinde kültürlenmiş BHK21 hücreleri, MDCK hücreleri; ve Vero hücreleri, PK hücreleri, ST hücreleri, Marc145 hücreleri vb mikro taşıyıcı süspansiyon kültürü yardımıyla her hücrenin farklı özellikleri vardır.
Süspansiyon hücreleri
Süspansiyon hücreleri "thp-1" 200x
Genel olarak, süspansiyon hücrelerinin kullanımı yapışık hücrelere göre daha kolaydır çünkü süspansiyon hücrelerinin geçişi için herhangi bir trypsinization gerekli değildir. Ancak bu, süspansiyon hücrelerinin büyümesinin yapışık hücrelerden daha kolay olduğu anlamına gelmez. Acemiler için daha zordur. Her zaman çeşitli problemler vardır: örneğin, neden hep ölü hücreler ve hücre farklılaşması ortaya çıkar; geçişin kolay olduğu, ancak sonucun farklılaşma olacağı konusunda hemfikir; Kriyoprezervasyon ve iyileşmeden sonra problemler tekrar ortaya çıkıyor!
Şimdi, süspansiyon hücrelerinin kültürlenmesiyle ilgili bazı önemli noktaları tartışalım~
Nokta 1: Yeter sabır, çok gerekli
Birçok süspansiyon hücresi, kriyoprezervasyondan yeni kurtarıldıklarında nispeten zayıf canlılığa sahiptir. Bu sırada hücrelerin kendi kendini onarmasını tamamlayıp logaritmik büyüme aşamasına girmesini bekleyecek kadar sabırlı olmamız gerekiyor. Örneğin, THP-1 (insan monositik lösemi) genellikle çözülmeden normal çoğalmaya kadar 7-10 günlük bir iyileşme süresine ihtiyaç duyar; Jurkat, Klon E6-1 (insan T lenfositik lösemi hücreleri) de iyileşmeden sonra 5-7 güne ihtiyaç duyar. Donmadan önceki duruma geri dönün. Acemiler bu dönemde eğitimden vazgeçebilir, bu yüzden lütfen daha sabırlı olun! Bu tür hücreleri yetiştirmek aynı zamanda bir sabır geliştirme sürecidir!
Nokta 2: Aşılama yoğunluğunu kavrayın
Genel olarak, süspansiyon hücrelerinin yoğunluğu 500,000/ML'den düşük olmamalıdır. Birçok süspansiyon hücresi yoğunluğa bağımlıdır ve düşük yoğunluğun neden olduğu çoğalmama da acemiler için yaygın sorunlardan biridir. Tabii ki, W6/32 (fare B hücresi hibridoma hücreleri) gibi yoğunluk yüksek olduğunda durumu kötüleşen çok az hücre vardır. Bu nedenle, bilinmeyen hücreleri yetiştirmeden önce hücrelerin özelliklerini kavramak için ilgili bilgileri aramak çok önemlidir. Sadece kendinizi ve düşmanı tanıyarak tüm savaşları kazanabilirsiniz!
Ortam değiştirme sıklığı "açıkça" ile sınırlandırılmamalıdır. Hücreler canlılardır. Sürekli bir kültür döngüsü sırasında, hücrelerin iyi bir büyüme durumunu korumak için hücrelerin büyüme durumuna bağlı olarak ek ortam ve glikoz gibi belirli besinler birkaç kez eklenebilir. . Süspansiyon kültürü işlemi sırasında, hücrelerin çoğalması, orijinal ortamdaki besin maddelerinin tüketimi ve metabolitlerin artması ile hücrelerin canlılığı azalacak ve besin maddelerinin zamanında takviyesi, hücreleri nispeten iyi bir yaşam ortamı haline getirecektir. Burada ayrıntılara girmeyeceğim ve sık sık santrifüjleme ve sıvı değişiminden kaçınmayacağım.
Sıvı değiştirme yöntemi hakkında konuşalım:
①Santrifüjlü tam sıvı değişim yöntemi
Yani, santrifüjleme (800-1000rpm, 5dk) ile eski ortamın tamamını çıkarın ve yeni ortamla değiştirin. Bu yöntem, "cilt katı" iyi yükseltilmiş süspansiyon hücrelerinin (K562 gibi) orta ikamesi için veya hücrelerin iyi durumda olduğu ve yoğunluğun yüksek olduğu ve büyük bir ortam tüketimine neden olduğu mevcut durum için uygundur. Bu yöntemin avantajı, ortamın tamamen değiştirilmesi ve bazı hücre kalıntılarının giderilebilmesidir, ancak aynı zamanda hücrelerde belirli bir dereceye kadar mekanik hasara neden olacaktır.
②Santrifüjlü yarım değişim yöntemi
Yani, yüzde 50 hücre süspansiyonunu santrifüjleyerek (800-1000rpm, 5dk), taze ortamın hacminin yüzde 50'sini değiştirin. Bu yöntem, "ikiyüzlü" kültürü zor olan hücreleri (thp-1 gibi) veya yoğunluğun düşük olduğu ancak ayarlama durumunda daha fazla kalıntının çıkarılması gereken durumu karşılaştırmak için uygundur.
③Sedimantasyon sıvı değişim yöntemi
Yani, bir santrifüj kullanmak yerine, taze ortamın tamamını veya bir kısmını değiştirmek için ortamı hücrelerden ayırmak için yerçekimi ile doğal çökeltme yöntemi kullanılır. Bununla birlikte, uygulama sınırlamaları vardır - yalnızca belirli bir boyutta hücre kümeleri oluşturabilen hücreler için uygundur (aksi takdirde doğal olarak yerleşemezler ve yalnızca düşük hızda santrifüjlenebilirler), özellikle de çoğalmak için hücre agregasyonuna dayanan hücrelerle uğraşırken. NK-92, NK- 92 MI, Jurkat gibi. Bu yöntem, sıvı değişim işlemi sırasında santrifüj işleminin neden olduğu mekanik hasarı en aza indirirken, kümelenmiş hücre kütlesini korur ve hücre kalıntılarının çıkarılması nispeten eksiksizdir.
Yukarıdaki noktalarda uzmanlaştıktan ve iyi bir hücre tohumundan sonra, "güzel" süspansiyon hücreleri yetiştirmek hemen köşede!
hücre kültürü plakası
Yongyue Medical'in U şeklindeki hücre kültürü plakası çoğunlukla, 100,000-seviyeli bir saflaştırma atölyesinde üretilmiş, ışınlamayla sterilize edilmiş, DNaz, RNaz ve pirojen içermeyen tıbbi sınıf polistiren (PS) kullanılarak süspansiyon hücrelerinin kültürlenmesi için kullanılır -ücretsiz, Güvenlik ve çevre koruma.
Hücre kültürü plakaları, çeşitli bakteri kültürlerinin ihtiyaçlarını karşılamak için çeşitli özelliklerde mevcuttur. Ürün türleri, 6-iyi, 12-iyi, 24-iyi, 48-iyi, 96-iyi, ve 384-iyi, hangi 96-kuyu düz tabanlı, U tabanlı, V tabanlı dip olarak ayrılmıştır; U-şekilli kültür plakaları çoğunlukla süspansiyon hücrelerinin kültürlenmesi için kullanılır; V şeklindeki kültür plakaları çoğunlukla immünolojik hemaglütinasyon deneyleri için kullanılır.
