PCR algılama
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) bir DNA parçasını kalıp olarak kullanır ve DNA polimeraz ve nükleotid substratının katılımıyla DNA yapısal ve fonksiyonel analiz için yeterli miktarda amplifiye edilir. PCR saptama yöntemi, bakteriyel enfeksiyon hastalıklarının klinik olarak hızlı teşhisinde son derece önemli bir öneme sahiptir.
PCR prensibi, doğal DNA'nın replikasyon sürecine benzer şekilde, bilinen iki dizi arasında yer alan bir DNA fragmanını amplifiye etmek için kullanılır. Amplifiye edilecek DNA molekülü bir şablon olarak kullanılır ve şablonun 5'ucu ve 3'ucunu tamamlayan bir çift oligonükleotit fragmanı primer olarak kullanılır. DNA polimerazın etkisi altında, yarı ayrılmış replikasyon mekanizmasına göre şablonu takip eder. Yeni DNA sentezinin tamamlanmasına kadar zincir uzatma, bu işlemi tekrarlayın, hedef DNA parçası amplifiye edilebilir.
(PCR), spesifik DNA fragmanlarını in vitro olarak enzimatik olarak sentezlemek için bir yöntemdir. Yüksek sıcaklıkta denatürasyon, düşük sıcaklıkta tavlama ve uygun sıcaklık uzatma adımlarından oluşur. Yüksek hassasiyet, kolay kullanım ve zaman tasarrufu gibi özellikler. Sadece gen izolasyonu, klonlama ve nükleik asit dizi analizi gibi temel araştırmalarda değil, hastalıkların tanısında veya DNA ve RNA'nın olduğu her yerde kullanılabilir. Polimeraz zincir reaksiyonu (Polimeraz Zincir Reaksiyonu, kısaca PCR), hücresiz moleküler klonlama veya spesifik DNA dizisi in vitro primer yönlendirmeli enzimatik amplifikasyon teknolojisi olarak da bilinir.
DNA'nın yarı ayrılmış replikasyonu, biyolojik evrim ve geçiş için önemli bir yoldur. Çift iplikli DNA, çeşitli enzimlerin etkisi altında denatüre edilebilir ve tek bir iplik halinde eritilebilir. DNA polimeraz ve bir promotörün katılımıyla, çift sarmallı DNA, tamamlayıcı baz eşleşmesi ilkesine göre aynı iki moleküle kopyalanabilir. Deneylerde, DNA'nın da yüksek sıcaklıklarda denatüre edilip eritilebildiği ve sıcaklık düşürüldüğünde tekrar çift zincir halinde yeniden üretilebildiği bulundu. Bu nedenle, sıcaklık değişiklikleri yoluyla DNA'nın denatürasyonunu ve renatürasyonunu kontrol ederek ve primerleri promotör olarak tasarlayarak, DNA polimeraz ve dNTP'lerin eklenmesi, spesifik genlerin in vitro replikasyonunu tamamlayabilir.
Basit olan nokta, özel ekipman kullanmak, dNTPS, Mg2+, spesifik primerler, DNA polimeraz ve tampon sistemi kullanmak, in vitro amplifikasyon için DNA örneği olan şablonu eklemek ve elektroforez yapmaktır. Amplifiye edilebilirse ve amplifiye edilen ürünün boyutu hedef bantla tutarlıysa, primer ve şablonun spesifik olduğu ve algılama indeksinin pozitif olduğu anlamına gelir.
PCR nükleik asit saptama yöntemleri ve adımları
Nükleik asit testi beş adım gerektirir: numune alma, numune tutma, tutma, nükleik asit ekstraksiyonu ve bilgisayar testi.
Nükleik asit tespiti
İlk adım, insan salgılarını toplamak ve nazal testi veya farinks testi ile farinks ve bilateral faringeal bademciklerin burun boşluğunu veya arka duvarını silmektir.
İkinci adımda, tıbbi personel numuneyi tuttu, test parçası kafasını hücre koruma solüsyonuna daldırdı ve kuyruğu kırdıktan hemen sonra tüp kapağını vidaladı.
Üçüncü bölümde, numuneyi hava geçirmez bir torbaya koyun, saklayın ve zamanında incelemeye gönderin.
Dördüncü adım, numuneyi nükleik asidi çıkarmak için laboratuvara göndermektir.
Beşinci adımda, ekstrakt bir floresan PCR amplifikasyon reaksiyonuna tabi tutulur.
Ayrıca bazı sarf malzemelerine ve enstrümanlara ihtiyaç duyar
PCR Aleti, PCR Tüpü, Pipet Ucu, Derin Kuyu Plakası, Rezervuar ve reaktifler eklendi