PCR teknolojisi, DNA'nın doğal replikasyon sürecine benzer ve özgüllüğü, hedef dizinin her iki ucunu da tamamlayan oligonükleotid primerlerine dayanır. PCR üç temel reaksiyon adımından oluşur: denatürasyon, tavlama ve uzatma. Bu reaksiyon işlemi PCR reaksiyon kabında gerçekleştirilir. Gen amplifikasyon aletinin sürekli geliştirilmesiyle, reaksiyon kabı ayrıca santrifüj tüpünün 1,5 ml'den 0,2 ml'ye (0,25 ml) ince duvarlı {{ 7}},2 ml PCR için ayrılmıştır. , 0.1mlpcr tüpü. PCR amplifikasyon reaksiyonlarının sayısındaki artışla birlikte, PCR şeritleri ve PCR plakaları için yüksek verimli gen amplifikasyon kapları kademeli olarak oluşturulur.
PCR üç temel reaksiyon adımından oluşur: denatürasyon-tavlama-uzatma
Şablon DNA'nın denatürasyonu:
Şablon DNA belirli bir süre yaklaşık 94 dereceye kadar ısıtıldıktan sonra, şablon DNA'nın çift sarmallı DNA'sı veya PCR amplifikasyonu ile oluşturulan çift sarmallı DNA ayrıştırılır, böylece hazırlamak için primer ile birleştirilebilir. bir sonraki reaksiyon turu için.
Şablon DNA'nın primerlerle tavlanması (renatürasyonu):
Kalıp DNA ısıtılarak tek bir sarmal halinde denatüre edildikten ve sıcaklık yaklaşık 55 dereceye düşürüldükten sonra, primerler, şablon DNA'nın tek sarmalının tamamlayıcı sekansı ile eşleştirilir.
Primerlerin uzatılması:
Taq'ın etkisi altında, DNA şablon-primer konjugatı, baz eşleştirme ve yarı ayrılmış replikasyon ilkesine göre şablon DNA zincirini tamamlayıcı yeni bir yarı ayrılmış replikasyon zincirini sentezlemek için reaksiyon ham maddesi olarak dNTP'yi kullanır.
PCR Teknolojisinin Temel Prensipleri
Teknoloji, şablon DNA, primerler ve dört deoksiribonükleotid varlığında DNA polimerazın enzimatik sentez reaksiyonuna dayanır.
DNA polimeraz, küçük bir çift sarmallı DNA parçasıyla sentezi başlatmak için tek sarmallı DNA'yı şablon olarak kullanır. Bir veya iki sentetik oligonükleotit primeri, kısmi çift sarmallı bir DNA oluşturmak için tek sarmallı DNA şablonundaki tamamlayıcı bir sekansla birleştirilir.
Uygun bir sıcaklık ve ortam altında, DNA polimeraz primerin 3'-OH ucuna deoksimononükleotit ekler ve bunu, yeni bir DNA tamamlayıcı sarmalı sentezlemek için şablonun 5'→3' yönü boyunca uzanmak için başlangıç noktası olarak kullanır.
PCR tüpleri ve santrifüj tüpleri arasındaki fark
PCR tüpleri:
PCR reaksiyon plakası, toplu reaksiyonlar için özel olarak tasarlanmış 96-iyi veya 384-iyidir. İlke, PCR makinesinin ve sıralayıcının veriminin genellikle 96 veya 384 olmasıdır.
Santrifüj tüpü:
Santrifüj tüpü mutlaka bir PCR tüpü değildir. Santrifüj tüplerinin kapasitelerine göre birçok çeşidi bulunmaktadır. Yaygın olarak kullanılanlar 1.5ml, 2ml, 5ml, 15 veya 50ml'dir ve en küçüğü (250ul) PCR tüpü olarak kullanılabilir.
PCR tüpleri nasıl seçilir
Sıcaklık için en doğru yeri seçme umuduyla PCR tüplerini yerleştirmeyi seçtik.
Sıcaklığın en doğru konumu, modülün altındaki sıcaklık sensörünün üzerindeki konum olmalıdır (sensörün hatalı sıcaklığından bağımsız olarak).
Farklı PCR cihazlarının sıcaklık sensörünün konumu farklıdır.
Örneğin, AB'nin 2720'sinin ortasında yalnızca bir tane vardır, MJ'nin 200'ünün sol alt, orta ve sağ üst olmak üzere üç sensörü vardır, Eppendorf'unki A veya H sırasında olmalıdır ve Dongshenglong 811'in üç sıcaklık sensörü vardır, B{{3} } seçilmelidir , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, çünkü bu noktalar sıcaklık dakik noktalarıdır.
