Hücre kültürü ortamı, yeni hücre sentezi ve hücre metabolizması gibi biyokimyasal reaksiyonlar için gerekli madde ve enerjiyi karşılayacak kadar besin maddesi içermelidir. Hücre kültürü ortamının ana bileşenleri su, amino asitler, vitaminler, karbonhidratlar, inorganik tuzlar ve diğer yardımcı besinlerdir. Bu nedenle, günlük deneylerde hücre kültür ortamının sterilizasyon yöntemine ve ilgili önlemlere dikkat etmeliyiz.
hücre kültürü
1. Farklı hücre kültürü ortamları için sterilizasyon yöntemleri ve önlemleri
Hücre kültürü ortamının sterilizasyon yöntemleri, otoklav sterilizasyonu ve membran filtrasyon sterilizasyonu olarak ikiye ayrılır. Farklı kültür ortamları, farklı besinleri nedeniyle farklı sterilizasyon yöntemlerine sahip olabilir.
Otoklav
MEM gibi bazı ortamlar otoklavlanabilir, bu ortamlar genellikle L-glutamin ve sodyum bikarbonat içermez ve genellikle ortam otoklavlandıktan sonra eklenir. Ayrıca L-glutamin yerine yüksek basınçlı glutamat (L-alanil-L-glutamin gibi) kullanılabilir. Otoklavlanabilir ortam, sterilizasyon süresini uzatmadan 121 derece, 15 psi ve 15 dakikada minimum besin kaybıyla tamamen sterilize edilir.
Çoğu hücre kültürü ortamı, otoklavlama için uygun değildir. Kültür ortamı genellikle vitaminler, proteinler, polipeptitler, büyüme faktörleri ve diğer maddeleri içerdiğinden, bu maddeler yüksek sıcaklık veya radyasyona maruz kalma altında denatürasyona veya fonksiyon kaybına yatkındır, bu nedenle yukarıda bahsedilen sıvılar çoğunlukla bakterileri uzaklaştırmak için filtrelenir ve sterilize edilir. Filtrasyon ve sterilizasyon için birçok filtre membranı mevcuttur ve malzemeleri çoğunlukla PES, naylon, polikarbonat, selüloz asetat, nitroselüloz, PTFE, seramik vb.dir. Membran filtrasyon sterilizasyonu günümüzde yaygın olarak kullanılan ve uygun bir yöntemdir. 0,2 μm gözenek boyutuna sahip filtre zarları sıklıkla kullanılır ve bazıları 0,1 μm gözenek boyutunu kullanır. Yüksek basınçlı filtrasyon ile karşılaştırıldığında, membranların bir ömrü vardır ve daha pahalıdır, ancak hücre kültürü ortamındaki besinler için daha az yıkıcıdır.
2. Farklı hücre kültürü ortamlarının saklanması sırasında alınacak önlemler
Genel olarak, sıvı hücre kültürü ortamı -20 derecede dondurulmamalıdır, çünkü çözülme sırasında kültür etkisini etkileyecek besinler çökelebilir. Normal şartlarda ışıktan 2 ~ 8 derece uzakta saklanmalıdır. Kullanmadan önce buzdolabından çıkarıp dengelenmesi için oda sıcaklığına getirin. Normal sıvı ortam 6 ila 12 ay geçerlidir. Sıvı hücre kültürü ortamının uzun süreli depolanmasından kaçınmaya çalışın. İçerisindeki glutamin saklama süresinin uzamasıyla yavaş yavaş ayrışacaktır. Hücre büyümesi iyi değilse, glutamin eklenip eklenmeyeceğini belirlemek için besiyerindeki glutamin içeriğini test etmeyi düşünebilirsiniz. . Ticari olarak temin edilebilen sıvı hücre kültürü ortamının belirli bir son kullanma tarihi vardır. Sıvı hazırlamak için kuru toz hücre kültürü ortamını kullandıktan sonra, düşük sıcaklıkta da (2 ~ 8 derece) saklanmalıdır. Ortamdaki glutaminin kolay bozunmasına ek olarak, ortamdaki diğer bileşenler de artan sıcaklıkla bozunabilir veya çökelebilir.
