Hücre Kirlenmesini Önleme Yolları: Bilmeniz Gereken Pipetleme İpuçları
Hücre kültüründe kontrol edilen birçok değişken arasında belirli bir değişken tüm deneyi etkiler: kontaminasyon. Hücresel kontaminasyona katkıda bulunan bir faktör her zaman radarda değildir ve sessizce hücre sağlığını ve ölçüm verilerini etkileyebilmesine rağmen, pipetleme kontaminasyonudur.
Deneyler tasarlanırken pipetlerin, pipet uçlarının ve pipetleme programlarının seçimine çok az dikkat edilir. Pipetleme kontaminasyonunu önlemek için bir battaniye solüsyonu (otoklavlama) bile yaygın olarak inanıldığı kadar etkili olmayabilir.
Hücre kültürünün ilk kuralı: kontaminasyondan kaçının. Başarılı hücre kültürü için steril teknik neden bu kadar önemlidir?
Aseptik teknik, güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmenin tek yoludur. Kirlilik hücre büyümesini, metabolizmayı ve sağlığı etkileyebilir -- bilim adamlarının incelemekle ilgilendiği bir konu. Kontamine hücre hatları istenilen özelliklere sahip değildir ve kontaminasyonun şiddetine göre her seferinde farklı işlev görürler. Ayrıca, kirletici maddeler ilgilendiğiniz hücreleri aşırı büyütürse, yanlış organizmayı incelemeye başlayabilirsiniz.
Bilim adamları sıklıkla ne tür kirleticilerle karşılaşır?
Yaygın kontaminasyon kaynakları bakteri, maya ve küftür. Hücre kültürü çalışmalarında saptanması ve yok edilmesi en zor olan mikoplazmadır. Daha az yaygın olan kontaminasyon türleri, örneğin laboratuvar sarf malzemelerindeki plastik sızıntıları içerir.
Hücre kontaminasyonunun yaygın nedenleri nelerdir?
Yaygın bir kontaminasyon kaynağı, kontamine pipetlerin ve filtresiz uçların kullanılması gibi zayıf pipetlemedir. Ayrıca, inkübatörler veya laminer akış kabinleri gibi aletlerin yetersiz dekontaminasyonu gibi iyi laboratuvar uygulamalarının olmaması da bir sorundur. Mikoplazmayı gidermek için, 0,2 µm filtre yerine 0,1 µm filtre kullanılarak filtreleme yapılması gerekir.
Üç pipetleme kontaminasyonu:
1. Pipetten numuneye kontaminasyon: Pipet veya pipet ucu numuneyi kontamine eder.
Nasıl kaçınılır:
Pipet gövdesinin kirlenmesini önlemek için steril filtre uçları kullanın.
Her numuneden sonra pipet ucunu değiştirin.
Pipetleri düzenli olarak etanol ile otoklavlayın veya sterilize edin. Otoklav uyumlu bir pipet seçin.
2. Numuneden pipete kontaminasyon: Numunenin pipet gövdesine pipetlenmesi pipeti kontamine eder.
Nasıl kaçınılır:
Örneklerin pipet gövdesine girmesini önlemek için filtre uçları veya pozitif yer değiştirme uçları kullanın.
Pipetleme yaparken pipeti dikey konumda tutun. Pipeti dik olarak saklayın.
Pipetleme yaparken şişeyi eğin.
Numunenin pipete sıçramasını önlemek için düğmeyi yavaşça bırakın. Yumuşak çıkarma işleviyle donatılmış bir pipet seçin.
3. Numuneler arası kontaminasyon: Kalan pipetleme numuneleri bir sonraki numuneye aktarılır. Genellikle aynı uç birden çok kez kullanıldığında ortaya çıkar.
Nasıl kaçınılır:
Her numuneden sonra pipet ucunu değiştirin.
Numunenin pipet gövdesine girip bir sonraki numuneye geçmesini önlemek için filtre uçları veya pozitif yer değiştirme uçları kullanın.
Numune sızıntısını önlemek için pipet ucunun pipete kapatıldığından emin olun. Örneğin, Yongyue Medical'in bahşişi.
Bilim adamlarının farkında bile olmayabilecekleri kirlilik faktörleri var mı?
Otoklavlamanın etkinliği genellikle doğrulanmaz ve otoklav düzgün çalışmıyorsa, otoklavlanan pipet uçları steril olmayabilir. Koruyucu ambalaja sarılmış önceden sterilize edilmiş filtreler, bu tür kazaları önlemek için en güvenli seçenektir. Yüksek kaliteli pipet uçları için ön sterilizasyon işlemi, ön sterilizasyonun etkinliğini sağlamak için düzenli olarak doğrulanır.
Pipetleme ve dağıtım araçları, bilim adamlarının numuneleri steril bir ortamda işlemesini nasıl kolaylaştırır?
Doğru pipetleri ve pipet uçlarını seçmek, aseptik iş akışını kolaylaştırabilir. Yongyue medikal pipetlerin temizlenmesi ve aletsiz açılması kolaydır, bu da günlük temizliği hızlandırır. Otoklavlama, kontaminasyonu gidermede etanollü mendillere göre daha etkili olduğundan, Sartorius mekanik pipetleri tamamen otoklavlanabilir, bu da pipetlerinizi güvenilir bir şekilde dekontamine edebileceğiniz anlamına gelir. Yumuşak uç çıkışı, uç çıkarıldığında olası kontaminasyon riskinin sıçramasını önler. Önceden sterilize edilmiş filtre uçları, numunelerinizi çapraz kontaminasyondan korur. Yongyue tıbbi uçlar ayrıca sızdırmaz ambalaj içinde paketlenmiştir, bu da saklama ve teslimat koşullarında herhangi bir kontaminasyonun uçlarla veya uç kutusuyla temas etmeyeceği anlamına gelir.
Bilim adamları kirliliği nasıl önleyebilir? Steril çalışma için en iyi ipuçlarınız nelerdir?
İlk olarak, iyi laboratuvar uygulamaları ve çalışma adımlarının dikkatli bir şekilde planlanması. Laminer akış kabininde yalnızca belirli bir iş akışı için gerekli olanı tuttuğunuzdan ve aynı anda bir hücre kültürü kullandığınızdan emin olun. Ayrıca, mikoplazma gibi kirletici maddeler için düzenli olarak yapılan testler, içinizin rahat olmasını ve sonuçlarınıza güvenmenizi sağlar. Steril koşullar altında çalışırken, önceden sterilize edilmiş filtre uçlarına ve steril reaktiflere harcanan paraya değer.
